O estudo teve como objetivo determinar in vitro a atividade antimicrobiana de antissépticos e desinfetantes utilizados no serviço de atenção primária à saúde de uma cidade do norte do Paraná, utilizando microrganismos padronizados pelo Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde da Fundação Oswaldo Cruz. Para tanto, foram realizadas análises da atividade antimicrobiana e da estabilidade química de três diferentes antissépticos e um desinfetante utilizados no serviço de atenção primária à saúde. A partir das análises realizadas no primeiro, sétimo, décimo quarto e vigésimo primeiro dias, após a abertura dos frascos, verificou-se que as amostras mantiveram sua atividade antimicrobiana in vitro em relação às cepas padronizadas, evidenciadas pela ausência de crescimento de unidades formadoras de colônias e estabilidade química dos princípios ativos dos antissépticos. O estudo permitiu verificar a eficácia das amostras frente a análises microbiológicas in vitro utilizando microrganismos padronizados.